Manual

MANUAL PARA USUARIOS DE INSTALACIONES HABITACIONALES

Servicio de Apoyo Veterinario Especializado – SAVE
Universidad Estatal de Campinas (UNICAMP)
2020

Manual para usuarios de Bioterium
1ª Edición – 2017
2ª Edición – 2018
3ª Edición – 2020

Preparado por
Paula
Ana Tada Fonseca Brasil Antioquia
Denise Isoldi Seabra

Revisado por
Paula
Ana Tada Fonseca Brasil Antioquia

Este manual está dirigido a todo el personal directamente involucrado con animales de laboratorio, sean empleados o usuarios de cualquiera de los bioterios de la Universidad Estadual de Campinas – UNICAMP, y tiene como objetivo presentar, de forma resumida, las principales directrices para el uso de sus instalaciones, estandarizando conductas y procedimientos, con el fin de garantizar el bienestar y la salud de los animales mantenidos, desde su nacimiento hasta su destino final.

El desarrollo de este documento resalta el compromiso de esta Universidad con los principios técnico-científicos, humanitarios y éticos, buscando garantizar el uso responsable de los animales criados, mantenidos y/o utilizados en protocolos de investigación, bajo su responsabilidad.

El siguiente texto fue elaborado con base en la siguiente legislación nacional vigente, así como guías de referencia nacionales e internacionales:

• Ley 11.794, de 08 de octubre de 2008 (Ley Arouca);
• Ley 11.105, de 24 de marzo de 2005 (Ley de Bioseguridad);
• Resolución Normativa CONCEA No. 37, de 15 de febrero de 2018;
• Resolución Normativa CONCEA No. 33, de 18 de noviembre de 2016;
• Resolución Normativa CONCEA No. 30, de 02 de febrero de 2016;
• Resolución Normativa CONCEA No. 25, de 29 de septiembre de 2015;
• Resolución Normativa CONCEA No. 15, de 16 de diciembre de 2013;
• Ordenanza CONCEA No. 465, de 23 de mayo de 2013;
• Ordenanza CONCEA No. 1.332, de 03 de diciembre de 2014;
• RDC ANVISA No. 222, de 28 de marzo de 2018;
• CONAMA No. 358, de 29 de abril de 2005;
• Ley nº 12.305, de 2 de agosto de 2010 (Política Nacional de Residuos Sólidos);
• Clasificación de riesgo de agentes biológicos – Ministerio de Salud, 2da edición – 2010;
• Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio, NRC 2014, 8.a ed.

Se debe facilitar información más detallada en el propio vivario, en forma de procedimientos operativos estándar (SOP).

• Embalaje: acción de empaquetar residuos segregados en bolsas o recipientes que eviten fugas y resistan la perforación y la rotura.
• Agentes biológicos: microorganismos capaces o no de causar algún tipo de infección, alergia o toxicidad en el cuerpo humano, tales como: bacterias, hongos, virus, clamidias, rickettsias, micoplasmas, parásitos y otros agentes, líneas celulares, priones y toxinas.
• Bioseguridad: acciones encaminadas a prevenir y minimizar los riesgos inherentes a las actividades, buscando proteger la salud de las personas y de los animales y preservar el medio ambiente.
• Cadáver animal: cuerpo del animal después de la muerte.
• CEUA: Comité de Ética en el Uso de Animales.
• CONCEA: Consejo Nacional de Experimentación Animal.
• CQB: Certificado de Calidad de Bioseguridad.
• EPC: Equipo de Protección Colectiva.
• EPP: Equipo de protección individual.
• Eutanasia: matanza de animales por medios humanitarios, en condiciones que impliquen, según la especie, un mínimo de sufrimiento físico o mental.
• Experimentos: procedimientos realizados en animales vivos, con el fin de dilucidar fenómenos fisiológicos o patológicos, utilizando técnicas específicas y preestablecidas.
• Filo Chordata: animales que tienen como características exclusivas, al menos en la fase embrionaria, la presencia de notocorda, hendiduras branquiales en la faringe y un único tubo nervioso dorsal.
• Insumos: productos proporcionados a los animales como alimento, agua y virutas.
• Macroambiente: ambiente físico secundario, donde se encuentran contenidos los microambientes o ambientes primarios.
• Maravalha: material de cama tipo aserrín, utilizado para forrar jaulas de roedores.
• Microambiente: ambiente en contacto directo con el animal, es decir la jaula de alojamiento.
• Residuos sanitarios del grupo A: residuos con posible presencia de agentes biológicos que, por sus características, puedan presentar riesgo de infección, recogidos en el Anexo I del RDC 222 de 2018.
• Residuos sanitarios del grupo D: residuos que no presentan riesgo biológico, químico o radiológico para la salud o el medio ambiente, y que pueden asimilarse a los residuos domésticos, enumerados en el Anexo I del RDC 222 de 2018.
• Residuos sanitarios del grupo E: residuos cortantes o escarificantes, tales como: agujas, bisturís, ampollas de vidrio, hojas de bisturí, lancetas, tubos capilares, micropipetas, portaobjetos y cubreobjetos, espátulas y todos los utensilios de vidrio rotos en el laboratorio (pipetas, tubos de extracción de sangre y placas de Petri), enumerados en el Anexo I del RDC 222 de 2018;
• Subfilo Vertebrata: animales cordados que tienen como características exclusivas un gran cerebro encerrado en una caja craneal y una columna vertebral.

La utilización de animales en protocolos de investigación está sujeta a la aprobación del proyecto por la CEUA de esta Universidad, según lo previsto en la Ley 11.794 de 08/10/2008.

Los protocolos deberán ser presentados para su evaluación completando el “Formulario Unificado de Solicitud de Autorización para el Uso de Animales en Experimentación y/o Enseñanza” disponible en el sitio web cielo  En el mismo lugar encontrará instrucciones para la presentación de proyectos, calendarios de reuniones y otra información relevante.

Tras el análisis, los investigadores recibirán una carta de la CEUA indicando el estado del proyecto de investigación, que podrá ser aprobado, rechazado o, en su caso, solicitar aclaraciones. El proyecto sólo podrá iniciarse después de la emisión del Certificado de Aprobación por parte de la CEUA-UNICAMP. Copia de este documento deberá ser enviada al animalario donde se desarrollará el proyecto y sólo a partir de este momento se autorizará su inicio. El documento deberá permanecer disponible en el vivario hasta que se concluyan los trabajos.

Es necesaria la capacitación de los usuarios antes de iniciar las actividades, la cual incluye el conocimiento de los procedimientos generales de uso de las instalaciones del vivario, así como los procedimientos relacionados con el contacto directo con los animales y las técnicas experimentales relacionadas con el estudio a desarrollar.

La formación mínima consistirá en realizar el curso online “Principios básicos en la experimentación animal.

Los docentes/investigadores son responsables de transmitir la información a sus estudiantes y colaboradores.

De acuerdo con el Decreto Nº 45.781 del 27 de abril de 2001, los animales en tránsito deben estar siempre acompañados de la documentación de transporte, que consiste en Certificado de salud e Guía de tránsito animal (GTA). En el caso de animales genéticamente modificados (OGM), el usuario deberá atender la Ley nº 11.105/2005 y normativa complementaria de la CTNBio. Las directrices se detallan en el dossier “Transporte de animales”, disponible en el sitio web cielo en el área GUARDAR.

Para garantizar el mantenimiento de los estándares sanitarios de las colonias y no comprometer las investigaciones en curso, se recomienda que los animales del CEMIB/UNICAMP sean llevados a los vivarios, siempre que haya espacio físico adecuado para su alojamiento.

La entrada de animales de otros orígenes sólo podrá permitirse cuando sean de estándar sanitario igual o superior a los animales mantenidos en el vivario.

Para el ingreso de animales provenientes de fuentes distintas al CEMIB/UNICAMP se requiere autorización previa del coordinador y del médico veterinario responsable por los aspectos técnicos del tratamiento. Esta autorización tendrá en cuenta el análisis del último informe sanitario de los animales.

Como regla general, los animales que hayan sido utilizados fuera de las instalaciones del vivario no deben regresar a sus edificios originales.

Por razones de seguridad y salud, El acceso al vivario sólo está permitido a personas autorizadas.:empleados, estudiantes y docentes/investigadores con protocolos de investigación aprobados por la CEUA.

El bioterio deberá mantener el control de acceso a sus instalaciones. Preferentemente, este control deberá ser electrónico, admitiéndose, como mínimo, un registro de acceso mediante la firma de un libro de actas, permitiendo la trazabilidad, en caso de ser necesario.

Se recomienda contar con una hoja de cálculo para la programación previa del uso de las instalaciones con el fin de optimizar la ejecución de actividades por parte de los diferentes grupos.

No se deben llevar efectos personales (incluidos teléfonos móviles) a las habitaciones de los animales y se pueden guardar en los casilleros provistos en la entrada, cuando estén disponibles. Sólo se permite el acceso con el material estrictamente necesario para realizar las actividades.

Las restricciones contempladas en este artículo tienen como objetivo prevenir la contaminación cruzada, salvaguardar la salud de los animales y el adecuado desarrollo de los protocolos de investigación. Asimismo, minimizan el riesgo de propagación de agentes infecciosos y potencialmente patógenos fuera del vivario.

Para evitar tráfico innecesario, asegúrese de tener a mano todos los materiales necesarios para realizar su investigación. Si es necesario, trae contigo un guión para facilitar tu trabajo.

Al ingresar al vivario, los empleados y/o usuarios deberán desinfectarse las manos con alcohol y utilizar EPP (bata, gorro, mascarilla, cubrepiés y guantes de procedimiento), siguiendo el siguiente orden:

• Ponte el pie profesional;
• Desinfecte sus manos con alcohol al 70% o alcohol gel al 70%;
• Póngase guantes de procedimiento desechables;
• Use la mascarilla cubriendo la boca y la nariz;
• Ponte el gorro cubriendo todo el cabello;
• Use el delantal, que deberá ser de manga larga;
• Póngase un segundo par de guantes, cubriendo el puño del delantal;
• Desinfecte la superficie de los guantes con alcohol al 70% o gel de alcohol al 70%.

Las especies animales normalmente utilizadas en investigación son muy sensibles a las condiciones ambientales (temperatura, humedad, ruido y olores), por lo que se recomienda:

• Respetar a uno período mínimo de aclimatación de al menos 10 a 14 días, para que los animales recibidos en el vivario se acostumbren a las nuevas condiciones de alojamiento antes del inicio del protocolo experimental;
• Realizar actividades en grupos pequeños para evitar ruidos excesivos que puedan causar estrés a los animales;
• El tránsito y la estancia en el vivario deberán ser lo más tranquilos y silenciosos posibles para garantizar el bienestar de los animales alojados y el buen desarrollo de los protocolos de investigación;
• No utilizar perfumes, colonias y cosméticos en general;
• No utilizar teléfonos celulares y dispositivos de sonido y/o electrónicos en las áreas internas del bioterio, incluso si están en modo vibración;
• Por razones de seguridad, no está permitido el uso de auriculares;
• Para evitar accidentes, no está permitido el uso de relojes, anillos y pulseras cuando el usuario esté trabajando directamente con animales;
• Desinfecte las superficies de trabajo antes y después de su uso con sanitizantes (alcohol al 70%, amonio cuaternario o VIRKON).

Enfatizamos que los sanitizantes, excepto el alcohol al 70%, deben prepararse al momento de su uso para mantener su acción potencial.

recordamos eso no están permitidos el consumo y almacenamiento de comida y/o bebidas en cualquiera de las instalaciones del vivario.

Los animales deben mantenerse en ambientes climatizados y con fotoperiodo controlado. La temperatura y la humedad del macroambiente deben ser monitoreadas y registradas diariamente, y mantenidas dentro de valores aceptables para cada especie, con la menor variación posible.

Para garantizar el bienestar de los animales durante todo el periodo en que permanezcan alojados en el vivario, se deberán respetar las recomendaciones de superficie mínima. La densidad ocupacional se define en función del peso del animal, la superficie del suelo por animal y la altura de la jaula. También es importante asegurarse de que las especies sociables, como los roedores, no se alojen individualmente.

Las jaulas deberán permanecer debidamente identificadas con fichas y éstas deberán ser fijadas mediante portafichas adecuados. No se permite el uso de borradores ni post-its y, de igual forma, las tarjetas no deben pegarse a la jaula con cinta adhesiva. A continuación puedes ver el plantilla de formulario de identificación estándar Recomendado para los bioterios de la UNICAMP (disponible en el área GUARDAR para impresión), conteniendo la información básica necesaria.

No se deben alojar en la misma habitación especies diferentes (ratas y ratones, por ejemplo) (RN 15, CONCEA).

Los intercambios de aire en las salas de animales deben realizarse con 100% renovación, y no debe haber intercambios con el aire de la propia habitación. El suministro de 15 a 25 cambios de aire por hora En los animales es una recomendación aceptable para mantener la calidad del aire en el macroambiente a un volumen constante y puede asegurar también la calidad del aire en el microambiente (RN 15, CONCEA).

La jaula debe estar provista de lecho limpio y seco en cantidad adecuada para permitir la absorción de la orina, cubriendo todo el fondo. Las virutas deben disponerse de tal manera que se consiga, en promedio, 1,0 cm de alto. Es importante tener en cuenta este detalle, ya que una cantidad excesiva de virutas de madera puede dificultar el acceso del animal al bebedero e impedir un adecuado flujo de aire en los microaisladores. Asimismo, el exceso de cama puede entrar en contacto directo con el pico del bebedero, provocando fugas de agua y aumentando la humedad en el ambiente interno y reduciendo el área seca disponible, lo que compromete el bienestar de los animales.

Una frecuencia mínima de limpieza de: 02 cambios/semana para ratones y 03 cambios/semana para ratas.

Los animales deben tener libre acceso al agua y a alimentos de buena calidad. El ayuno o restricción de agua y/o alimento sólo se permite con autorización de la CEUA o bajo recomendación expresa del médico veterinario y en estos casos la información deberá constar claramente en la ficha de identificación.

No alimente a animales que formen parte de otro protocolo de investigación. Si se encuentran sin comida ni agua, avisar al responsable quien tomará las medidas necesarias.

También se recomienda tener materiales de repuesto listos para posibles emergencias como fugas en los bebederos o muerte de animales entre los cambios de agua de rutina. Con esta medida aseguramos que los animales se mantengan siempre en un ambiente limpio y seco, con una cantidad adecuada de agua y comida.

Siempre que sea posible, los materiales que entrarán en contacto con los animales deberán esterilizarse para protegerlos de agentes potencialmente patógenos. Se debe prestar especial atención a la cama tipo maravalha.

Es importante recordar que para mantener su estado de salud original, estos animales deben ser alojados en ambientes con filtro absoluto (HEPA) y, a ser posible, en rejillas ventiladas. Todo material en contacto directo debe ser previamente esterilizado, incluyendo agua y alimentos.

Los procedimientos rutinarios deben realizarse preferiblemente en flujos laminares.

Mantener el bienestar animal es de fundamental importancia en cualquier etapa de la vida. Al permanecer en un ambiente cerrado, el enriquecimiento ambiental puede ser una alternativa para mejorar la calidad de vida de los animales, constituyendo un factor a considerar e implementar siempre que sea posible.

Para los roedores, sugerimos adoptar iglús o tubos de PVC que permitan a los animales permanecer y sentirse protegidos. Los materiales para este tipo de enriquecimiento deberán ser lavables y desinfectables, sin grietas ni aristas vivas y de tamaño adecuado a la especie. Los materiales también pueden ser de papel o cartón, pero deben esterilizarse antes de su uso y desecharse semanalmente. También se puede proporcionar material para el nido (algodón, papel, arpillera), que en este caso también deberá esterilizarse previamente.
del uso y desechado semanalmente. Los conejos suelen aceptar bien la alfalfa seca, las plataformas y las bolas de plástico.

Los animales deberán ser retirados de la habitación por los usuarios con la mayor calma posible y llevados a la sala de procedimientos donde se realizarán los procedimientos. Preferiblemente, con el fin de reducir el tráfico local, sólo una persona debe ingresar a la sala de animales, preservando al máximo las condiciones ambientales.

Los animales deberán ser transportados en sus propios habitáculos, siempre después de retirar el bebedero para evitar fugas de agua.

Luego de finalizados los procedimientos, los animales deberán ser devueltos a su ubicación original, colocando nuevamente el bebedero. El laboratorio, el equipo y los utensilios deberán limpiarse y desinfectarse después de su uso.

Asegurarse de que las salas de procedimientos y las salas de animales se mantengan ordenadas para no interferir con el trabajo de otros equipos, además de garantizar la salud y el bienestar de los animales.

La disposición final de cadáveres, carcasas y residuos generados por el uso de animales debe seguir la legislación federal, estadual y municipal vigente, o legislación sustitutiva como, por ejemplo, la Política Nacional de Residuos Sólidos, Ley nº 12.305, de 2 de agosto de 2010 (RN 30, CONCEA).

Los residuos generados en las instalaciones de animales se clasifican como residuos de servicios sanitarios grupo A (subgrupos A1, A2, A4 o A5), grupos D y E. Consultar la RDC nº 222, de 28 de marzo de 2018 que regula las Buenas Prácticas de Gestión de Residuos de Servicios de Salud.

Prestar atención a cadáveres, sangre, tejidos animales, virutas de madera, filtros de aire y otros materiales con presencia de agentes biológicos de clase de riesgo II o superior (Salmonella spp., Leishmania spp., Toxoplasma spp., Plasmodium spp., Schistosoma spp., y otras bacterias, parásitos, hongos y virus) que, por sus características, puedan presentar riesgo de infección para humanos y animales, y/o contaminación ambiental. Consulte la “Clasificación de riesgo de agentes biológicos del Ministerio de Salud – 2ª edición, 2010.

Los residuos del servicio de salud deben depositarse en una bolsa plástica de color blanco lechoso, identificada con el símbolo infeccioso y luego cerrada adecuadamente.

Se debe prestar atención a la cantidad de material desechado para evitar roturas y fugas del contenido allí almacenado. La bolsa debe ser reemplazada cuando alcance 2/3 de su capacidad o inmediatamente si la degradación y liberación de olores son intensos. Los residuos infecciosos no pueden reciclarse, reutilizarse ni readaptarse, ni siquiera para la alimentación animal.

Cuando estén potencialmente contaminados con agentes patógenos, deben esterilizado en autoclave antes de su eliminación. Obligatorio, Todos los residuos clasificados como NB2 o superior deben ser esterilizados en autoclave en el propio vivario. antes Para ser remitido para su recogida a una empresa especializada.

La eliminación de materiales punzantes deberá realizarse en cajas destinadas a tal efecto. En esta categoría se incluyen hojas de bisturí, jeringas, agujas, etc.

Se permite la separación del conjunto jeringa-aguja con ayuda de dispositivos de seguridad y se prohíbe la desconexión y el retapado manual de las agujas.

Los investigadores, docentes y usuarios de animales con fines docentes o de investigación científica son responsables de los aspectos relacionados con el bienestar de los animales. Es su responsabilidad planificar o ejecutar proyectos o protocolos, considerando que los animales son seres sintientes y que su bienestar es un factor esencial al momento de realizar actividades de docencia o investigación científica (RN 33, CONCEA).

Le recordamos que cada usuario es responsable de su grupo de animales y debe realizar inspección diaria del mismo con el fin de garantizar un alojamiento adecuado y una atención rápida. La atención debe extenderse a los fines de semana y días festivos, siempre que sea necesario, como cuando los animales están en períodos críticos de recuperación postquirúrgica.

Recomendamos no realizar procedimientos quirúrgicos los viernes ni vísperas de festivos, para que los animales permanezcan en constante monitorización en las primeras 48 horas posteriores a intervenciones más invasivas.

Cualquier ocurrencia relacionada con el vivario debe registrarse en Libro de registro de incidentes disponible exclusivamente para este propósito. Se deben registrar los problemas con la programación del uso de las habitaciones y las observaciones relacionadas con los animales y las condiciones ambientales, tales como: alojamiento, cambios bruscos de temperatura y/o humedad, cambios en la apariencia y/o comportamiento. Este libro será utilizado como canal de comunicación directo entre los usuarios y los responsables del sitio, buscando garantizar y promover el bienestar de los animales.

La siguiente documentación deberá mantenerse actualizada y disponible en todo momento, incluso para su verificación por parte de los organismos de control:

• Certificados de aprobación del proyecto, emitidos por la CEUA-UNICAMP;
• Mapa de Riesgos;
• Manual de Bioseguridad;
• Procedimientos operativos estándar (POE);
• Guía de Tránsito Animal (GTA) y certificado sanitario correspondiente;
• Autorización del CIBio de la unidad para el uso de animales transgénicos;
• Factura de compra y receta de medicamentos de uso controlado (por ejemplo, anestésicos como xilazina, ketamina, isoflurano y otros);
• Registro del uso y stock de medicamentos controlados (por ejemplo, anestésicos).

Destacamos que las instalaciones de animales están sujetas a inspección por parte de los siguientes organismos:

• CONCEA – Consejo Nacional de Control y Experimentación Animal;
• CRMV-SP – Consejo Regional de Medicina Veterinaria;
• ANVISA – Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria;
• MAPA – Ministerio de Agricultura, Ganadería y Abastecimiento;
• CTNBio – Comisión Técnica Nacional de Bioseguridad;
• CIBio – Comité Interno de Bioseguridad.